液相色譜儀的分離方法以及操作過程

液相色譜儀的操作過程

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相╃↟，稱為經典液相色譜法╃↟，此方法柱效低✘│↟││、時間長（常有幾個小時）│·。液相色譜法(HighperformanceLiquidChromatography╃↟，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上╃↟，於60年代後期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的│·。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻╃↟，小顆粒具有高柱效╃↟，但會引起高阻力╃↟，需用高壓輸送流動相╃↟，故又稱高壓液相色譜法(HighPressureLiquidChromatography╃↟，HPLC)│·。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(HighSpeedLiquidChromatography╃↟，HSLP)│·。也稱現代液相色譜│·。

液相色譜儀的操作過程如下▩▩：

  　1.  翻開HPLC工作站（包含計算機軟體和色譜儀）╃↟，銜接好活動相管道╃↟，銜接檢測體系│·。

　  2. 對抽濾後的活動相進行超聲脫氣10-20分鐘│·。

　　3.過濾活動相╃↟，根據需求挑選不一樣的濾膜│·。

　　4進入HPLC操控介面主選單╃↟，點選manual╃↟，進入手動選單│·。

　　5. 有一段時刻沒用╃↟，或許換了新的活動相╃↟，需求先沖刷泵和進樣閥│·。沖刷泵╃↟，直接在泵的出水    口╃↟，用針頭抽取│·。沖刷進樣閥╃↟，需求在manual選單下╃↟，先點選purge╃↟，再點選start╃↟，沖刷時速度不要超越10ml/min│·。

　　6. 調理流量╃↟，初度運用新的活動相╃↟，能夠先試一下壓力╃↟，流速越大╃↟，壓力越大╃↟，通常不要超越2000│·。點選injure╃↟，選用適宜的流速╃↟，點選on╃↟，走基線╃↟，調查基線的狀況│·。

　　7. 規劃走樣辦法│·。點選file╃↟，選擇select?users?and?methods╃↟，能夠選擇現有的各種走樣辦法│·。若需樹立一個新的辦法╃↟，點選new?method│·。選擇需求的配件╃↟，包含進樣閥╃↟，泵╃↟，檢測器等╃↟，根據需求而不一樣│·。選完後╃↟，點選protocol│·。一個完整的走樣辦法需求包含▩▩：a.進樣前的穩流╃↟，通常2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject變換；d.走樣時刻╃↟，隨不一樣的樣品而不一樣│·。

　　8. 進樣和進樣後操作│·。選定走樣辦法╃↟，點選start│·。進樣╃↟，一切的樣品均需過濾│·。辦法走完後╃↟，點選postrun╃↟，可記載資料和做符號等│·。悉數樣品走完後╃↟，再用上面的辦法走一段基線╃↟，洗掉剩餘物│·。

　　9 關機時╃↟，先關計算機╃↟，再關液相色譜│·。

液相色譜儀的分離方法▩▩：

色譜法的分離原理是▩▩：

溶於流動相(phase)中的各組分經過固定相時╃↟，由於與固定相(stationaryphase)發生作用（吸附✘│↟││、分配✘│↟││、離子吸引✘│↟││、排阻✘│↟││、親和）的大小✘│↟││、強弱不同╃↟，在固定相中滯留時間不同╃↟，從而先後從定相中流出│·。又稱為色層法✘│↟││、層析法│·。

色譜法zui早是由俄國植物學家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時發現的╃↟，色譜法(Chromatography)因之得名│·。後來在此基礎上發展出紙色譜法✘│↟││、薄層色譜法✘│↟││、氣相色譜法✘│↟││、液相色譜法│·。